母豬繁殖障礙疾病的血清學調查報告

D取100UL陰性血清分別加入C1、C2、D1、D2孔中。

E取100UL陽性血清分別加入A1、A2、B1、B2孔中。

F取100UL稀釋的待檢血清分別加入相鄰的PRRS抗原孔和MARC—145細胞抗原孔(NHC)中。

H在室溫下孵育30mim。

L將反應板孔里的液體倒入廢液缸,並在吸水紙上扣乾。

J每孔加入300UL洗滌液(含Tween—20的PBS),置室溫約3mim,棄去孔中液體,重複3—5次,最後一次在吸水紙水輕輕扣乾。

K每孔加入100UL酶標抗體複合物,在室溫下孵育30mim。並利用此空隙,取等量底物濃縮液和底物稀釋液混勻(如5.5ml:5.5ml)。

L重複I、J操作。

M每孔加入100UL稀釋好底物溶液,在室溫下孵育15mim。

N每孔加入100  終止液

O用酶聯免疫檢測儀於650NM波長下測定各孔的吸光度值。

Q結果判定:

a pc:PRRS—NC:PRRS≥0.150,試驗方成立。

b S/P≥0.4,樣品血清PRRS抗體陽性;S/P<0.4,樣品血清PRRS抗體陰性。

1.2.2  豬瘟檢測方法:正向血凝試驗

a取一潔淨玻片,以蠟筆劃成3—4c㎡小格,如下圖

血清號 第1格 第2格 第3格 第4格

陽性血清對照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

陰性血清對照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

血清樣品1 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

血清樣品2 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

b試驗前,先將待檢血清、標準血清和抗原置於室溫,使其達到20℃。

B將待檢血清、標準血清按上表中的量,垂直接觸玻片分別加到各方格內。

C搖勻抗原,每一血清格內分別垂直加入0.03ml抗原。

D自0.01ml血清格開始,用牙籤將抗原與血清完全混合,攤開直徑2CM左右,依次至0.02ml、0.04ml、0.08m血清格,一個血清樣使用一牙籤。

E輕輕搖動玻片後,室溫靜置5—8min。春冬季節室溫較低時,可置於30℃左右的溫箱中。

F記錄結果

出現大凝集片或小粒狀物,液體完全透明,即100%凝集。

有明顯凝集片和粒,液體幾乎完全透明,即75%凝集。

有可見凝集片和顆粒,液體不甚透明,即50%凝集。

1.2.3  豬偽狂犬檢測方法:乳膠凝集試驗

操作步驟

取待檢樣品、陽性/陰性對照血清和稀釋液各一滴,分別置於玻片上,各加一滴乳膠抗原,用牙籤或火柴棍攪拌,並輕輕搖動1—2min後,於3—5min內觀察結果。

也可將血清作倍比連續稀釋,每個稀釋度加乳膠抗原進行定量分析。

C判定結果:

A所有對照成立,即陽性血清呈“ ”,陰性血清和稀釋液呈“—”,試驗方有效。樣品出現“++”以上者為陽性。

1.2.4  豬細小病毒檢測方法:乳膠凝集試驗。

2  調查內容

2.1  流行病學調查:通過查閱記錄,調查種源、胎次,發病的季節性。

2.2  飼養管理調查:主要包括飼料質量,營養成份,有無霉變;有無環境、機械等不良因素引起的,防疫、免疫、消毒是否落實到位。

2.3  臨床病例剖解:包括對繁殖母豬的臨床檢查及對發病母豬所產部分弱仔及新生病仔豬的病理剖檢觀察。

2.4  血清學檢測:對採得的212份血清樣品進行藍耳病抗體檢測和部分血清的偽狂犬、豬瘟、豬細小病毒檢測。

2  檢測結果及討論

3.1發生繁殖障礙的母豬有長白、約克及長白╳約克,發病母豬沒有明顯的品系差別;發病的胎次主要集中在第一胎,在第一胎過後,很多母豬不再表現明顯的繁殖障礙病(說明在第一胎過後產生了抗體對該病有一定的免疫保護力);發病沒有季節性,一年四季均可發病;發病豬主要表現產死胎、木乃伊胎、弱仔和新生仔豬發病死亡。