srb為革蘭氏陰性菌
二、厭氧型為生物的培養
1.srb菌
採用
hungate厭氧操作技術、絕跡稀釋法以及“滾管”培養對樣本進行分離,多次純化獲得純菌株srb。
具體方法:向改良後starkey培養基中加入0.2%的刃天青溶液,培養基煮沸後,加入l-半光鹽酸鹽0.5g,通入高純氮氣驅氧30min,121℃滅菌20min,固體培養基加入16%的瓊脂糖。
單獨配 3%的feso4?(nh4)2 so4 厭氧
srb菌株於液體培養基中37℃培養48h 後, 在olympus cover-018光學顯微鏡下革蘭氏染色觀察。
2.dnb菌
方法同
srb菌,ph值最好在7,
藥品:
(nh4 ) 2so4 3 g, kcl 0.1 g, k2hpo4 0.5 g, m gso4?7h2o 0.5g,
ca (no3 )2 0.01 g, feso4?7h2o 8.0 g, 蒸餾水1 000 ml
121℃滅菌15 m in。
恆溫搖床培養箱振盪培養
由於此項操作開始時間較晚,至實習結束,菌落還未完成一個完整周期的培養。
三、水生細菌的計數
1.血球板計數法
取樣:先清洗一個容量為100毫升的取樣瓶或燒杯。取樣前輕輕振盪試管攪拌,待分布均勻後,立即用注射器針管取樣,取樣的量為1毫升。加蒸餾水100倍稀釋。
樣品放於計數板:放置前必須將血球計數板和蓋玻片清洗乾淨、擦乾,不能有油污染和雜質。將血球計數板平放在桌子上,蓋好蓋玻片;然後把樣品瓶輕輕搖動幾下,菌分布均勻,並立即用乾淨的微吸管取樣品,迅速把微細吸管放到蓋玻片的邊緣處,輕壓微細吸管的橡皮帽,使樣品流入計數板內。注意控制樣品流入量,不能過多,過多則流入到溝內;也不能過少,過少則計數時不準確,應充滿畫線方格及其周邊部分。還應注意蓋玻片下不能有氣泡存在,否則會造成計數不準確。樣品吸入血球計數板後,稍停1分鐘,待細菌沉降在玻片表面上再在顯微鏡下進行計數。
計數:計數中央大格的4個角的中格,每箇中格有25個小格,逐一計數,4箇中格相加總計數100個小格。計數時應從計數框一角開始,在計數框邊緣的標本應按"計上不計下、計左不計右"的原則,計數出細菌的總量後,按下式計算出每毫升菌液中的細菌數量:細菌數量=100個小格的細菌數×4×10000×稀釋倍數。