第六章分光光度法
第一節紫外可見分光光度法
一、基本原理
紫外--可見分光光度法：是根據物質分子對波長為200-760nm這一範圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。操作簡單、準確度高、重現性好。
波長長(頻率小)的光線能量小，波長短(頻率大)的光線能量大。
100nm 200nm400nm 800nm 400um 1m
通指
x-射線紫外區可見區 紅外區 微波區 無線電波區
beer-lambert定律： a=e l c a--吸收度 e-吸收係數l ---液層厚度 c---溶液濃度
吸收度濃度與厚度的關係。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。
摩爾吸收係數：指在一定波長下，溶液濃度為1mol/l , 厚度為1cm時的吸收度，用表示。
百分吸收係數：指在一定波長下，溶液濃度為1%(w/v) , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
影響beer定律因素：化學因素，光學因素
二、紫外--可見分光光度計：主要部件：
1、 光源：要求光譜的光源，2、 氫燈和鎢燈(350nm)
3、 單色器：進口狹縫、準直鏡、色散元件(稜鏡和光柵)、聚焦透鏡和出口狹縫組成。
4、 吸收池：用光學玻璃製成的吸收池，5、 只能用於可見光區。用熔融石英(氧化矽)，6、 可見紫外光區。
7、 檢測器：光電池：(硒光電池：用於可見光；矽光電池：紫外可見光) 內阻小，8、 易疲勞。
光電管：內阻高，電流易放大 。
9、 訊號處理和顯示器
三、定性與定量方法：
(一)、定性鑑別：是多數有機化合物具有吸收光譜特徵。一般用對比法。
1、對比吸收光譜特徵數據2、對比吸收度(或吸收係數)比值3、對比吸收光譜的一致性
(二)、純度檢查：雜質檢查與雜質限量檢測
(三)、含量測定：
1、吸收係數法 2、標準曲線法3、對照法
第二節 螢光分析法
螢光分析法：利用螢光的物理特性而進行定性與定量測定的方法。螢光法比紫外可見靈敏。
螢光光度計：激發光源、樣品池、檢測器、濾光片和單色器。
第三節紅外分光光度計
紅外線：波長大於0.76um，小於500um的電磁波。hooke定律來描述分子的伸縮振動。
當分子的振動頻率與入射的紅外頻率相同時，分子對紅外產生吸收。伸縮振動和彎曲振動。
基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動能級由基態(v=0)躍遷至第一激發態時產生的吸收峰。
倍頻峰：振動能級由基態躍至第二、三激發態。統稱泛頻峰。
吸收峰：用於鑑別官能團存在的吸收峰稱特徵吸收峰。
指紋區：1250-400cm (8.0-25um)的低頻區稱為指紋區。
紅外分光光度計主要部件：光源、吸收池、單色器(稜鏡和光柵)和檢測器(真空熱電偶)及記錄裝置。
第七章色譜法
第一節概述
色譜法：是一種物理或物理化學分離方法。用於定性鑑別、純度檢查、含量測定。
分配係數：組分在固定相和流動相之間的分配平衡時的濃度之比。 k=
容量因子：又稱質量分配係數，即達到分配平衡後，組分在固定相和流動相中的質量之比。
第二節薄層分析法
一般指吸附薄層色譜法，固定相為吸附劑的薄層吸附法。k值越大隨展開劑移動的速度越慢。
比移徝：在薄層色譜法中，組分的遷移距離()與展開劑的遷移距離()之比稱為比移值() 。
r最佳範圍是0.3-0.5 ，可用範圍是0.2-0.8 。
吸附劑：吸附薄層色譜法的固定相。常用吸附劑有：矽膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素和聚醯胺。
矽膠：在105-110 c加熱30分，使矽膠吸附力增加，稱為活化。具微酸性，適分離酸性中性物質。
氧化鋁：鹼性、中性、酸性。中性用得多。
製備薄層板：要求吸附劑塗布均勻表面光滑，使用前檢查均勻度。2000版用機械塗布法。活化。
吸附劑與展開劑的選擇：分離極性較強的組分時，宜選用活性低(活度級別高)的薄層板，以極性強的展開劑展開。反之
點樣：體積宜在20ul 以下，樣徑不超過2-3mm ，點間距離為1.5-2.0cm，距底2.0cm 。
顯色方法：直接噴霧法、浸漬法、壓板法。
定性分析方法、純度檢查、定量分析方法(洗脫測定法和直接測定法)。
第三節氣相色譜法
氣相色譜法：以氣體為流動相的色譜法稱為氣相色譜法。不適用於難揮發和熱穩定性差的物質分析。
原理：各組分在固定相與載氣(流動相)間分配係數不等，按大小依次被載氣帶出色譜柱，小先流出。
一、基本原理：
(一)、基本概念：
一個組分的色譜峰用三項參數：峰高或峰面積(用於定量)、峰位(用保留值表示，用於定性)、峰寬(用於衡量柱效)。
(1)、保留時間 (tr) ：從進樣開始到某個組分的色譜峰頂點的時間間隔。
(2)、死時間 (t0)：分配係數為零的組分的保留時間。
(3)、相對保留值 (r)：兩組分的調整保留值之比。
(4)、半峰寬 (wh/2)：峰高一半處的峰寬。