2005《中國藥典》收載的青黴素鉀含量測定方法為hplc法，試驗條件同青黴素鈉項下：色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以0.1mol/l磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節ph值為2.5）-乙腈（70：30）為流動相；檢測波長為225nm；流速為每分鐘1ml。注射用青黴素鉀的含量測定方法同。
文獻報導的方法：
葉蘭鳳等用hplc法測定青黴素鉀的含量。儀器：agilent 1100高效液相色譜儀。色譜柱：ods c 18柱(250mm×4.6mm,5um)，以乙腈-甲醇-0.0mol/l磷酸二氫鉀溶液(15：10：75，用氫氧化鈉試液調節ph值為5.3)為流動相，檢測波長210nm。
梁雲愛等用二階導數差示脈衝極譜法測定青黴素鉀的含量。試驗預置電壓為-0.600v，脈衝振幅為40mv，掃描速度為300mv/s。
另外，金錄勝等用鏇光法，在20℃下測定注射用青黴素鉀的含量。