紫外可見分光光度法
一、基本原理紫外--可見分光光度法：是根據物質分子對波長為200-760nm這一範圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。操作簡單、準確度高、重現性好。波長長(頻率小)的光線能量小，波長短(頻率大)的光線能量大。 100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
x-射線 紫外區 可見區 紅外區 微波區 無線電波區
beer-lambert定律： a=e l c a--吸收度 e-吸收係數 l ---液層厚度 c---溶液濃度吸收度濃度與厚度的關係。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。
摩爾吸收係數：指在一定波長下，溶液濃度為1mol/l , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。百分吸收係數：指在一定波長下，溶液濃度為1%(w/v) , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
影響beer定律因素：化學因素，光學因素
二、紫外--可見分光光度計： 主要部件：
1、 光源：要求光譜的光源，
2、 氫燈和鎢燈(350nm)
3、 單色器：進口狹縫、準直鏡、色散元件(稜鏡和光柵)、聚焦透鏡和出口狹縫組成。
4、 吸收池：用光學玻璃製成的吸收池，
5、 只能用於可見光區。用熔融石英(氧化矽)，
6、 可見紫外光區。
7、 檢測器：光電池：(硒光電池：用於可見光；矽光電池：紫外可見光) 內阻小，光電管：內阻高，電流易放大 。
8、 易疲勞。
9、 訊號處理和顯示器
三、定性與定量方法：
(一)、定性鑑別：是多數有機化合物具有吸收光譜特徵。一般用對比法。
1、對比吸收光譜特徵數據
2、對比吸收度(或吸收係數)比值
3、對比吸收光譜的一致性
(二)、純度檢查：雜質檢查與雜質限量檢測
(三)、含量測定：
1、吸收係數法
2、標準曲線法
3、對照法
螢光分析法螢光分析法：利用螢光的物理特性而進行定性與定量測定的方法。螢光法比紫外可見靈敏。螢光光度計：激發光源、樣品池、檢測器、濾光片和單色器。
紅外分光光度計紅外線：波長大於0.76um，小於500um的電磁波。 hooke定律來描述分子的伸縮振動。當分子的振動頻率與入射的紅外頻率相同時，分子對紅外產生吸收。伸縮振動和彎曲振動。基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動能級由基態(v=0)躍遷至第一激發態時產生的吸收峰。倍頻峰：振動能級由基態躍至第二、三激發態。統稱泛頻峰。吸收峰：用於鑑別官能團存在的吸收峰稱特徵吸收峰。指紋區：1250-400cm (8.0-25um)的低頻區稱為指紋區。紅外分光光度計主要部件：光源、吸收池、單色器(稜鏡和光柵)和檢測器(真空熱電偶)及記錄裝置。