直接進樣(direct injection)是近幾年發展起來的一種樣品不需要經過預處理或只經簡單的處理後直接注入色譜中進行分析.
在用hplc進行體液中藥物分析或生物樣品分析時常需進行預處理,因為:1.為了使樣品的物理狀態適用於色譜柱.2.使帶測組分得到富集以達到儀器的靈敏度.
當組分樣品同時含有大量蛋白質或其他內源性雜支時,預處理的方法比較複雜繁瑣.因此近年來在直接進樣方面有了很大的發展,目的就是為了解決這類問題.主要集中於直接進樣用固定相,柱切換技術及膠束色譜等方面.
下面簡單的介紹這三方面:
1. 直接進樣用固定相
直接進樣用固定相有如下特點.
(1)在一定條件下固定相對蛋白質不保留或幾近不保留,而被測組分能夠被保留在柱上進行分離.
(2)當被測組分的k落在合理的範圍內時於固定相匹配的流動相中有機改性劑的溶度保持在低水平上,即固定相對被測組分的保留不能太強,避免由於流動相中有機改性劑的比例增加使蛋白質沉積在柱上.固定相具有以上的特徵主要是利用小孔徑矽膠對蛋白質的排阻性質和對矽膠基體表面進行適當的改性來實現的.例如當蛋白質的直徑大於矽膠孔徑時,蛋白質分子就完全被排阻於填料孔徑之外.因此為了使蛋白質不保留或幾近不保留需對矽膠進行改性.
改性後的矽膠可以分為兩類(1)矽膠內外具有不同的鍵合基團內表面親水,不吸附蛋白質,內表面疏水保留藥物.(2)矽膠的內外表面具有相同的組成,都鍵合有親水疏水的基團,其作用是首先引入親水基團調節外表面的疏水性,使蛋白質不沉積在外表面,但同時存在疏水基,外表面仍吸附部分蛋白質.但當飽和時就不在吸附了,其次被測組分進入填料的空隙中,於混合基團的疏水基作用,保留在固定相中.
目前主要套用的直接分析用固定相有以下幾種:
(a) 禁止疏水固定相（shp）
shp的矽膠上鍵合有親水性聚氧化乙烯的網狀結構，內有疏水性的苯基。小分子可以通過網狀結構，大分子則被禁止在柱填料間隙處被洗脫。此固定相具有穩定性好重現性好的特點，經過1000次含有甲氧苄啶的血清直接進樣，色譜柱性能無較太大改變。
(b) 混合功能基固定相（mep）
是指在多孔矽膠表面上同時鍵合有疏水和清水兩種基團的固定相。特點是對於親水性和疏水性的藥物均適用。可用於血清中極性較大的和非極性的藥物直接進樣分析，用這種固定相已成功的分析了血樣中的苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平等抗癲癇藥的分析。