四神丸處方為：肉豆蔻200g，補骨酯（鹽炒）400g，五味子（醋制）200g，吳茱萸（制）100g，大棗（去核）200g。
2005《中國藥典》四神丸含量測定項下：
色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-水（30：70）為流動相；檢測波長為245nm。理論板數按補骨酯素峰計應不低於6000。
供試品溶液的製備：取本品，研細，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇100ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300w，頻率33khz）20分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
文獻報導的常用方法現介紹如下：
田玉先等hplc法測定四神丸中五味子乙素的含量，色譜柱為c18柱(4.6×200mm,5μm)，流動相為甲醇-四氫呋喃-水(64：4：32)，檢測波長254nm。樣品用正己烷索氏回流提取。
陳偉等用sfe-cgc法測定四神丸中補骨酯素和異補骨酯素的含量，樣品用sfe法處理，採用含5%苯基矽氧烷交聯毛細管柱，蒽為內標液。氣化溫度250，檢測溫度280，柱溫210，載氣n2，柱頭壓55kpa，分流比50：1。
甄攀等用hplc法測定四神丸中吳茱萸鹼和吳茱萸次鹼的含量，色譜柱為ywg-c18 (250mm×4.6mm, 10μm)，流動相為水-甲醇-乙腈梯度洗脫：0-15min，水-甲醇-乙腈(40：30：30)；15-27min，乙腈-水(70：30)； 27min以後，水-甲醇-乙腈(40：30：30)。柱溫30℃，檢測波長225nm。
譚生建等梯度洗脫變換波長hplc測定四神丸中補骨酯素、異補骨酯素、吳茱萸鹼和吳茱萸次鹼的含量。以乙醇為溶劑，水浴回流提取。色譜柱為luna c18分析柱 (4.6mm ×250mm，粒徑5μm)，ods保護柱(5mm×50mm,粒徑5μm)，柱溫36℃，流動相甲醇(a泵)和水(b泵)，流速0.8ml/min。流動相洗脫及檢測波長變換程式：0.01min，λ296nm，b泵40%，14 min，b泵40%，16min，b泵28%，28min，290nm，38min，λ360nm，45min，b泵28%。