藥物分析輔導:銀杏葉片含量測定方法

   銀杏葉片為銀杏葉提取物經加工製成的片。
2005版《中國藥典》含量測定項下:
總黃酮醇苷
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑;以甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)為流動相;檢測波長為360nm。理論板數按槲皮素峰計應不低於2500。
供試品溶液的製備:取本品10片,除去包衣,精密稱定,研細,取約相當於總黃酮苷19.2mg的粉末,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇20ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250w,頻率33khz)20分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續濾液10ml,置 100ml錐形瓶中,加甲醇10ml,25%鹽酸溶液5ml,搖勻,置水浴中加熱回流30分鐘,迅速冷卻至室溫,轉移至50ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。
萜類內酯
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑;以正丁醇-四氫呋喃-水(1:15:84)為流動相;用蒸發光散射檢測器。理論板數按白果內酯峰計應不低於2500。
供試品溶液的製備:取本品10片,除去包衣,精密稱定,研細,取約相當於萜類內酯19.2mg的粉末,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250w,頻率33khz)20分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續濾液20ml,回收甲醇,殘渣加水10ml,置水浴中溫熱使溶散,加2%鹽酸2滴,用醋酸乙酯振搖提取4次(15ml,10ml,10ml,10ml),合併提取液,用 5%醋酸鈉溶液20ml洗滌,分取醋酸鈉液,用醋酸乙酯10ml洗滌。合併醋酸乙酯提取液及洗液,用水洗滌2次,每次20ml,合併水液,用醋酸乙酯 10ml洗滌,合併醋酸乙酯液,回收至乾,殘渣喲功能甲醇溶解並轉移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。
測定總黃酮苷含量時常用的流動相系統一般加入磷酸調節ph值,如:李芳等用hplc法測定銀杏葉片劑中總黃酮苷的含量,採用waters 高效液相色譜儀。色譜柱為 spherisorb c18φ(100mm×4.6mm,5μm),檢測波長:370mm,流動相:甲醇-0.3%h3po4 溶液(40:60),流速:1ml/min,柱溫:40℃。樣品用甲醇超聲處理。結果槲皮素在0.28~2.52μg之間線性關係良好,相關性顯著,平均加樣回收率為101.1%,rsd=2.69%。
測定黃酮含量時有採用hplc法,也有紫外分光光度法,如:陶巧鳳等採用hplc測定了11個製藥公司的15批銀杏葉片的黃酮(槲皮素 、山奈酚 、異鼠李素)的含量,採用waters 高效液相色譜儀。色譜柱為nova-pak c18(4μ) 200×4mm(大連化物所),流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液(1:1),檢測波長360nm,柱溫為室溫。樣品用甲醇超聲處理後,用4%硫酸溶液水解。丁青龍等用紫外分光光度法,以蘆丁為對照品測定銀杏葉片劑中總黃酮的含量,測定波長為500nm,樣品用70%乙醇回流提取。
測定內酯含量時,如:張雪琴等用hplc法測定銀杏葉片中銀杏內酯的含量,採用hp1100高效液相色譜儀,色譜柱為hypersil ods2( 250mm×410mm, 5μm ),流動相:23%ch3oh水溶液,體積流量1.0ml/min,柱溫25℃。理論塔板數以銀杏內酯b計算不低於5000。樣品用5%雙氧水回流提取,濾過, 濾液用醋酸乙酯萃取多次, 萃取液用1%nahco3水溶液萃取多次後, 再用1%na2so3水溶液萃取, 醋酸乙酯層繼續用蒸餾水和5%nacl溶液萃取,醋酸乙酯萃取液回收溶劑,用50%ch3oh定容。