中草藥及成方製劑顯微鑑別法介紹

顯微鑑別系指用顯微鏡對藥材的切片、粉末、解離組織或表面製片及成方製劑中藥味的組織、細胞或內含物等特徵進行鑑別的一種方法。 
鑑別時選擇有代表性的樣品,根據各該藥材鑑別項的規定製片。成方製劑根據不同劑型適當處理後製片。 
一、橫切片或縱切片:選取藥材適當部位,軟化後用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理後觀察。必要時可包埋後切片。 
二、粉末製片:取粉末少量,置載玻片上,攤平,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當試液處理後觀察。 
三、表面製片:將樣品濕潤軟化後,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。 
四、解離組織片:如樣品中薄壁組織占大部分,木化組織少或分散存在,可用氫氧化鉀法;如果品堅硬,木化組織較多或集成較大群束,可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前,應先將樣品切成寬或厚約2mm的小條或片。 
1.氫氧化鉀法 
置樣品於試管中,加5%氫氧化鉀溶液適量,加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去鹼液,加水洗滌後,取出少量置載玻片上,用解剖針撕開,以稀甘油裝置觀察。 
2.硝鉻酸法 
置樣品於試管中,加硝鉻酸試液適量,放置,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌後,照1.法操作裝置。 
3.氯酸鉀法 
置樣品於試管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸鉀少量,緩緩加熱,待產生的氣泡漸少時,再及時加入氯酸鉀少量,以維持氣泡穩定地發生,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌後,照1.法操作裝置。 
五、花粉粒與孢子製片:取花粉、花葯(或小的花朵)或孢子囊群(乾燥樣品浸於冰醋酸中軟化),用玻璃棒搗碎,過濾於離心管中,離心,取沉澱加新鮮配製的醋酐與硫酸(9∶1)的混合液1~3ml,置水浴上加熱2~3分鐘,離心,取沉澱,用水洗滌2次,加50%甘油與1%苯酚3~4滴,用品紅甘油膠封藏觀察。也可用水合氯醛試液裝置觀察。 
六、細胞及細胞內含物等的測量:在顯微鏡下測量細胞及細胞內含物等的大小,可用目鏡測微尺測量。先將目鏡測微尺裝入目鏡內,用鏡台測微尺標化。標化時,轉動目鏡,移動鏡台測微尺,使兩種量尺的刻度平行,左邊的“0” 刻度重合,再找第二條重合刻度。根據兩條重合刻度間兩種量尺的小格數,計算出目鏡測微尺每小格在該物鏡條件下所相當的大小(μm)。測量時,以目鏡測微尺測量目的物的小格數,乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物鏡下進行,但欲測量較長的如纖維、非腺毛等的長度時,則以在低倍物鏡下測量較為方便。記錄最大值與最小值(μm),可允許有少量略高或略低於藥典規定的數值。
 
七、細胞壁性質的檢定:
1.木質化細胞壁
加間苯三酚試液1~2滴,稍放置,加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。
2.木栓化或角質化細胞壁
加蘇丹ⅲ試液,稍放置或微熱,顯橘紅色至紅色。
3.纖維素細胞壁
加氯化鋅碘試液;或先加碘試液濕潤後,稍放置,再加硫酸溶液(33→50);顯藍色或紫色。
4.矽質化細胞壁
加硫酸無變化。
八、細胞內含物性質的檢定:
1.澱粉粒
(1)加碘試液,顯藍色或紫色。
(2)用甘油醋酸試液裝置,置偏光顯微鏡下觀察,未糊化的澱粉粒顯偏光現象;已糊化的無偏光現象。