本法系比較肝素標準品(s)與供試品(t)延長新鮮兔血或豬、兔血漿凝結時間的程度,以測定供試品的效價。
肝素標準品溶液的配製
精密稱取肝素標準品適量，按標示效價加0.9％氯化鈉溶 液溶解使成幾種不同濃度的溶液，相鄰兩種濃度每1ml中所含肝素單位數相差應相等,且不超過5個單位，一般可配成每1ml中含85、90、95、100、105、110、115、120、125等單位的溶液。
供試品溶液的配製
供試品如為粉末，精密稱取適量,按乾燥品計算，加0.9％氯化鈉溶液溶解使成每1ml中含1mg的溶液。供試品如為注射液,則按標示量加0.9％氯化鈉溶液稀釋至同樣濃度。
血漿的製備
按肝素生物檢定法中血漿製備法製備(附錄? d)。
檢定法
取管徑均勻(0.8×3.8cm)清潔乾燥的小試管8支,第1管和第8管為空白對照管，加入0.9％氯化鈉溶液0.2ml，第2～7管為供試品管，每管均加入供試品溶液0.1ml,再每管分別加入上述一種濃度的肝素標準品稀釋液0.1ml,立即混勻。取剛抽出的兔血適量，分別加入上述8支試管內,每管 0.8ml，立即混勻，避免產生氣泡,並開始計算時間，將小試管置37±0.5℃恆溫水浴中,從采動物血時起至小試管放入恆溫水浴的時間不得超過2分鐘；如用血漿,則分別於上述各管中加入0.7ml的血漿，置37±0.5℃恆溫水浴中預熱5～10分鐘，每管分別加入1％氯化鈣溶液0.1ml，立即混勻，避免產生氣泡,並開始計算時間。觀察並記錄各管凝結時間。
結果判斷
兩支對照管的凝結時間相差不得超過1.35倍。在供試品管的凝結時間不超過兩支對照管平均凝結時間150％的各管中，以肝素濃度最高的一管作為終點管。
同樣重複5次，5次試驗測得終點管的肝素濃度,相差不得大於10個單位。5次結果的平均值，即為硫酸魚精蛋白供試品(乾燥品)1mg中和肝素的單位數。