畢業論文引言

1.4  核苷酸的結構性質與檢測

1.4.1  核苷酸的結構性質

核苷酸是核酸的組成單位,它由三部分組成,分別為磷酸、戊糖和鹼基。核苷酸按戊糖的種類不同,可以分為核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸兩種,其中核糖核苷酸是rna的組成單位,而脫氧核糖核苷酸則是dna的組成單位。組成rna的核糖核苷酸按照核苷酸分子鹼基的不同,核苷酸可以分成四種,即5’-腺嘌呤核苷酸(amp)、5’-鳥嘌呤核苷酸(gmp),5’-胞嘧啶核苷酸(cmp)和5’-尿嘧啶核苷酸(ump)。

5’-腺嘌呤核苷酸(5’-amp)分子量347.22,自丙酮水溶液中可得含有兩分子水的結品。溶於熱水,pk3.8(鹼性基團)<1,6.2-6.4(磷酸根)。

5’-鳥嘌呤核苷酸(5’-gmp:)分子量363.23,含1/2分子水的結品,pk2.4(鹼性基團)、9.4(酸性基團)<1,6.1(磷酸根)。熔點190-200℃(分解)。 

5’-尿嘧啶核苷酸(5’-ump)分子量324.18,pk9.5(鹼基上酸性基團) <1,6.4(磷酸根)。

5’-胞嘧啶核苷酸(5’-cmp)分子量323.21,熔點233℃(分解)。pk4.5(鹼性基團)<1,6.3(磷酸根)。

四種核苷酸的結構式如下圖所示:

實際使用中,四種核苷酸主要以鈉鹽形式存在。其形態均為無色至自色結晶或白色結晶性粉末,在保藏和套用中多為核苷酸的二鈉鹽。

1.4.2  核苷酸的檢測

核酸水解產物核苷酸、核苷和鹼基的分析方法,主要有光譜法(紫外光吸收法)、質譜法、色譜法(高效液相色譜法、離子色譜、反相高效液相色譜(rp-hplc)、薄層色譜)、電泳法(毛細管電泳)等。其中毛細管電泳和高效液相色譜法的分離能力最強,在細胞分離方面有廣泛的用途,尤其是高效液相色譜法(hlpc)套用很多,紫外光吸收法套用方便,但準確率不高。離子交換液相色譜法具有較高的分離效率,但是需要對分離柱進行再生,分析的時間較長;反相液相色譜法具有快速、操作方便的特點,現有離子對反相和常規反相色譜,洗脫方法可採用等度洗脫,也可採用梯度洗脫。目前有許多關於核苷酸檢測這方面的報導:張志國,賈雲虹等用hplc和紫外檢測方法對乳粉中的四種核苷酸cmp、ump、amp、gmp含量進行了檢測,採用c-18柱,據報導結果完全符合要求。吉瓊梅等人用0.05mol/l的kh2po4為流動相的高效液相色譜法測定了棉寶中的5’-amp、5’-cmp、5’-gmp、5’-ump的分解率。黃曉蘭、李科德和陳雲華報導採用反相高效液相色譜可以分離15種核酸的水解產物,並介紹了該方法在酵母抽提物中的套用。霍小敏、屠春燕等人用反規液相色譜和梯度洗脫模式對酵母rna降解的4中核苷酸進行了分離和檢測。鄭理、朱懷恩等人用紫外光吸收法對保健品中的核酸含量進行了測定[7]。鄒耀洪、曹學增等對以hplc(高效液相色譜)與lc/ms(質譜)複合定性蘑菇柄中的5’-核苷酸進行了報導。韓鳳梅、楊新等人對四種單核苷酸的毛細管區帶電泳分離分析進行了報導。

1.5  核苷酸的生產套用

1.5.1  核苷酸生產方法概況

目前已經有多種方法可生產核苷酸及其衍生物。歸納起來,主要有以下三種:化學合成法、微生物發酵法及提取法。三種方法生產的工藝及產品均有很大的差別。