根據維生素d攝入不足或日光照射缺乏史，血磷＜40mg/dl，血清鹼性磷酸酶＞500iu/dl（正常兒童＜200iu/dl）。尿camp濃度升高。25（oh）d3是維生素在血漿中的主要存在形式，其正常值為25～125nmol/l（10～50ng/ml），佝僂病早期血清25（oh）d3即明顯降低，維生素d3治療時則升高，當＜8ng/ml時可診斷本病，是可靠的診斷指標。但一般醫院無條件進行該項檢測，因此，多以血生化及骨骼x線檢查進行診斷。
二、鑑別診斷 本病需與以下疾病鑑別。
1.先天性甲狀腺功能低下 生後2～3個月開始出現甲狀腺功能不足現象，並隨月齡增大症狀日趨明顯，如生長發育遲緩、體格明顯矮小、出牙遲、囟大而閉合晚。腹脹等，與佝僂病相似，但患兒智慧型低下，有特殊面容，血泊tsh、測定可資鑑別。
2.軟骨營養不良 本病頭大。前額突出。長骨骺端膨出、胸部串珠。腹大等與佝僂病相似，但四肢及手指短粗，五指齊平，腰椎前突。臀部後突。骨骼x線可見特徵性改變，如長骨粗短彎曲，乾骼端變寬，呈喇叭口狀，但輪廓光整，部他骨骼可埋入擴大的乾骼端中，
3.與其他病因所致的佝僂病的鑑別
（1）家族性低磷血症：本病多為x連鎖遺傳病，其有關基因已定位於xp22.1-p22.2，少數為常染色體隱性遺傳，也有散發病例，原發缺陷為腎小管重吸收磷和25（oh）d3羥化過程障礙。佝僂病症狀多發生在1歲後，2～3歲後仍有活動性佝僂病表現。血鈣多正常，血磷明顯降低，尿磷增加。對常規治療劑量維生素d無效，需同時口服磷，且每日需給維生素d30.05～0.25μg，或1，25（oh）2d30.5～1.5μg/d.
（2）遠端腎小管酸中毒：為遠曲小管泌氫不足，在量鈉、鈣從尿中丟失，導致繼發甲狀旁腺功能亢進，骨質脫鈣及佝僂病症狀，且維生素d療效不顯著。患兒骨骼畸形明顯，身材矮小，代謝性酸中毒，多尿，鹼性尿（尿ph＞6），血鈣、磷、鉀均低，血氯高，且伴低鉀症狀。
（3）維生素d依賴性佝僂病：常染色體隱性遺傳，分兩型：i型為腎臟1-羥化酶缺陷，至25（oh）d3轉變為1，25（oh）2d3過程發生障礙，血中25（oh）d3濃度增高；ⅱ型為靶器官1，25（oh）2d3受體缺陷，血中1，25（oh）2d3濃度增高。兩型在臨床上均表現為重症佝僂病，血清醫.學教育網原創鈣、磷顯著降低，鹼性磷酸明顯升高，並繼發甲狀旁腺功能亢進。i型患兒可有高胺基酸尿症；ⅱ型患兒的一個重要特徵為脫髮。
（4）腎性佝僂病：先天或後天原因所致的慢性腎功能障礙均會導致血鈣低，血磷高等鈣磷代謝紊亂；甲狀旁腺功能繼發性亢進使骨質普遍脫鈣，骨骼呈佝僂病改變。體徵多於幼兒後期逐漸明顯，形成侏儒狀態。